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myTXTL® 体外蛋白表达系统的特点

发布时间:2021-08-27      点击次数:268
  体外蛋白表达系统 Arbor Biosciences是基于大肠杆菌的体外蛋白表达系统:myTXTL无细胞体外蛋白表达系统(Arbor Biosciences中国代理)
 
  在大肠杆菌蛋白表达实验中,我们经常会遇到蛋白表达不出来、表达出的蛋白没有活性、蛋白表达过程中容易形成包涵体等情况,还要分析出现这些情况的原因。
 
  1、目的蛋白不适合在大肠杆菌中表达。包括稀有密码子、mRNA结构、跨膜区等;
 
  2、表达条件需要进一步优化。比如温度、分子伴侣、适合的表达宿主等;
 
  3、采用哪种温和复性条件可以提高蛋白活性,减少包涵体的形成等等。
 
  除此之外,几乎每出一点差错就需要重新开始实验,表达载体的构建、感受态细胞的转化、阳性克隆的鉴定、培养基的配制、小量诱导摸条件、大量诱导、离心富集细胞、超声裂解细胞、亲和富集与纯化。又需要额外花费一周、几周甚至半年的时间,时间成本高到让人心烦不已。
 
  现在有一个新技术:myTXTL无细胞蛋白表达技术,这个技术可以替代原核细胞大肠杆菌表达系统,可以解决蛋白表达不出来、表达的蛋白没有活性、原核蛋白表达产物有包涵体的问题。除此之外,这个技术能够应用于可溶蛋白和膜蛋白表达、蛋白质功能鉴定、高通量筛选、分子间互作分析。还适用于在大肠杆菌中难以表达的蛋白质、蛋白质分子定向进化、噬菌体生产、基因调控网络构建、基础研究(比如,CRISPR系统鉴定)、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白与小分子的相互作用、酶活检测等。
 
  myTXTL® 体外蛋白表达系统的特点:
 
  myTXTL® 是一种简单快速的蛋白质体外表达系统。基因的转录(Transcription, TX)和翻译(Translation, TL)基于大肠杆菌的内源TXTL机制,在体外建立高效的无细胞反应体系。同时,又保证了T7表达系统的兼容性。
 
  myTXTL®体外蛋白表达系统操作简单,仅需将线性模板或质粒与myTXTL® Master Mix混匀,目标蛋白在数小时内即可表达出来。不需要转化、克隆筛选和细胞裂解,避免了包涵体的形成。同时,避免了产物纯化过程中目标蛋白的损失。
 
  myTXTL蛋白表达系统一次实验可对多个样品进行操作,小的反应体系是12 μl,表达出来的蛋白浓度能达到1 μg/μL,反应体系可等比例扩大。
 
  反应系统里添加了7种大肠杆菌稀有密码子,去除了密码子偏好的问题,并且表达的蛋白可正常折叠。
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