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NGS工作流程可以分为这三步

发布时间:2021-11-18      点击次数:1243
  NGS工作流程通常从样品制备步骤开始,其成功与否对确保可靠的测序结果至关重要。为了获得足够数量和质量的核酸,需要对样品进行有效和均匀的研磨。机械裂解,更具体地说是珠磨式技术,被认为是样品研磨均匀化的黄金标准。

  NGS工作流程可以分为这三步:
  文库制备:为了节省资源,可以将多个文库混合在一起,在同一运行中进行测序——该过程称为多重分析。接头连接过程中,标签序列(或说“条形码”)会添加到每个文库。这些条形码可以在数据分析过程中区分文库。这步是为获取足够量的/目的的/前期适合上机测序而标准处理DNA。其程序主要有:片段化,连接,扩增。
  测序:在边合成边测序(SBS)过程中,化学修饰的核苷酸会通过天然的互补性与DNA模板链结合。每个核苷酸都有一个荧光标记和一个可逆终止子,后者可以阻止下一个碱基的掺入。荧光信号可以指示出加入的核苷酸种类,终止子被切割后,下一个碱基才可以继续结合。其实就是把把采集到的样品分离提纯成需要的基因组DNA,再把这些DNA打成小片段,然后再在这些DNA小片段两头接上识别标记和测序接头,最后再通过基因捕获技术筛选出目的DNA,根据需求PCR扩增。然后,就可以上机测序了。上机测序的过程就是读取这些。
  数据分析:可以使用直观的数据分析应用程序来分析NGS数据,无需进行生物信息学培训或另外雇佣实验室人员。这些工具可以进行序列比对、变异检出、数据可视化或解读。
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