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关于蛋白表达的几个常见问题

发布时间:2022-09-21      点击次数:30
  蛋白分泌表达的优点是什么?
 
  1) 一些可被细胞内蛋白酶所降解的蛋白质分泌到周质或培养基中可增加其稳定性;
 
  2) 有些在细胞内表达时无活性的蛋白分泌表达时能够按适当的方式进行准确折叠,增加到蛋白的活性;
 
  3) 由于蛋白质信号肽和编码序列间被切割,所以分泌蛋白产物不含氨基酸起始密码子ATG所编码的甲硫氨酸,而甲硫氨酸会影响很多蛋白的活性。
 
  蛋白在细胞质中表达,形成包涵体的原因是什么?
 
  胞内表达是外源蛋白在大肠杆菌中主要的表达形式。但是由于大肠杆菌的细胞质环境呈现还原性,不利于蛋白二硫键的形成和稳定,从而导致蛋白的不准确折叠,形成不溶性的包涵体。
 
  蛋白质动力学模型研究表明。活性蛋白的产率还取决于蛋白的合成速率、折叠速率和聚集速率。当外源蛋白在大肠杆菌中高效表达时,一旦形成新生肽链的聚集速度超过它们他的折叠速率就会导致包涵体的形成。
 
  应如何提高蛋白的可溶性表达?
 
  重组蛋白在大肠杆菌中大量表达时,很容易在胞内形成不可溶的包涵体,为后期的纯化复性带来麻烦。而且,复性所得到的蛋白活性很低甚至没有活性。因此,提高重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达是十分必要的。
 
  可以从以下几点进行优化:
 
  1) 选择合适的宿主细胞;
 
  2) 采用合适的融合标签表达;
 
  3) 选择合适的质粒载体;
 
  4) 优化培养诱导条件。
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