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FISH探针对杂交信号的检测方法

发布时间:2022-10-20      点击次数:75
  FISH采用了已知序列的、特异性的单链核酸作为探针,标记了生物素或荧光素,在一定的温度和离子浓度下通过碱基互补配对法则,使得DNA-DNA原位杂交,采用荧光法显示,最终将DNA在细胞爬片、组织切片的原始位置上标记出来的一种技术。
  FISH探针定位准确,核内核外清晰明了,功能机制更易确定;灵敏度高,信号放大倍数平均达到一百六十倍,轻松定位低拷贝数lncRNA;特异性强,集群式的探针能够大限度地保证FISH信号的高特异性;广泛应用于染色体结构变异检测、基因作图、基因定位、基因扩增、产前诊断,疾病检测等领域,在临床诊断上具有很大的影响。
  FISH探针杂交信号的检测方法:
  以荧光显微镜观察,在滤光镜激发下观察中期/间期细胞的荧光杂交信号,计数细胞和采集图像。每例分析一百到两百个间期细胞核细胞,重叠、破损、未去除细胞质和杂交信号微弱的细胞核不计入其中。对于双色双融合FISH,细胞内杂交信号相互靠近,小于1/10核直径的距离者计为一个信号。
  技术优势:
  原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度,故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足,这就是FISH技术。
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