FISH探针加样的注意事项

　　FISH探针可分为位点特异性探针和着丝粒探针，位点特异性探针又可分为计数探针和融合/分离探针。计数探针是通过标记一段特异性的DNA片段，通过计数信号的数量而判断染色体或基因状态的一种标记探针。由于正常人的染色体/基因是二倍体，那么正常人的检测信号就是两个，当信号多于两个或者少于两个，便可判断染色体或者基因发生了异常。

　　FISH探针基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析。

　　该技术具有快速、安全、灵敏度高以及探针可长期保存等特点，目前已广泛应用于细胞遗传学、肿瘤生物学、基因定位、基因作图、基因扩增、产前诊断及哺乳动物染色体进化研究等领域。

　　FISH探针的加样：参照选用厂商推荐或经过本实验室有效性验证纳入标准化操作流程文件的探针加样量，加到待杂交组织中央处，使用合适的盖玻片，橡胶水泥密封四边。

　　注意事项：

　　探针的使用和配制遵照本单位选用试剂的产品说明书操作；

　　盖玻片一般采用硅化盖玻片或无菌的蜡膜；

　　注意环境光强度，避免太阳光或强烈的光照；

　　加盖玻片时注意不要留有气泡，避免因气泡造成干片现象，导致无杂交信号或杂交率降低；

　　盖玻片边缘封胶不严密也会出现干片现象。