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细胞因子的应用及培养、冻存和复苏

更新时间:2023-04-19      点击次数:523
  大多数细胞因子是免疫应答的产物,在动物和人体内可发挥免疫学效应,终会通过上调免疫细胞对抗原物质的免疫应答,介导炎症反应而清除抗原物质。
 
  抗原刺激和病原微生物感染均可诱导体内产生细胞因子,因此细胞因子与疾病的发生、发展有着密切的关系,它们可参与疾病的发生、发展。
 
  另一方面,细胞株的培养、冻存和复苏分为以下三点:
 
  细胞株的培养、冻存和复苏
 
  1)细胞株的培养和传代 培养: 用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10%小牛血清和抗生素的培养液中,培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。
 
  在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养,3~4天传代一次。
 
  ★ 悬浮生长细胞的传代: 直接直接吸去或离心后吸去培养上清液,用新鲜培养液悬浮细胞,1:3或1:5稀释细胞后,分瓶继续培养。
 
  ★ 帖壁生长细胞的传代: 吸去培养液,用PBS洗涤细胞一次,加入消化液,在37℃中消化约3~10分钟,待细胞开始脱落时,倒去消化液,加入新鲜培养液,悬浮和吹打分散细胞。也可以待细胞全部消化脱落,500×g离心5分钟,去除消化液,用新鲜培养液悬浮细胞。1:3或1:5稀释细胞后,分瓶继续培养。
 
  2)细胞株的冻存: 1. 取培养2~3天生长旺盛的细胞,用细胞培养液将细胞配成2×106~2×107/ml。 在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜(或甘油),混匀后密封。置4℃ 1小时,-20℃ 2小时,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。
 
  3)细胞株的复苏: 复苏时,从液氮中取出冻存管,立即置37℃水浴中融化细胞。将细胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培养液中,置37℃ 5%CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养。悬浮细胞待细胞全部沉降后小心吸去上清液,更换新鲜的上述培养液,继续培养;帖壁细胞则培养2~3小时,待细胞帖壁后,倒去培养液,更换新鲜的上述培养液,继续培养。也可以在加入新鲜培养液以后,500×g离心5分钟,去上清液,加入新鲜培养液,继续培养。
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