磁力架是基于磁吸分离原理实现目标样品富集、纯化的工具,广泛用于分子生物学、微生物检测、临床检验等领域,搭配磁性微球 / 磁珠使用时,掌握以下技巧可大幅提升分离效率与样品纯度。
一、 基础操作技巧(通用型,新手必看)
1. 磁珠与样品的充分结合
加磁珠后,需将样品管轻柔颠倒混匀(避免剧烈震荡产生气泡),室温静置或恒温孵育,孵育时间根据磁珠说明书调整(通常 5–20 min)。
对于粘稠样品(如血液、组织匀浆),可适当延长孵育时间,或低速涡旋(转速<1000 rpm)10–20 s,促进磁珠与目标物质结合。
2. 磁吸分离的最佳操作
将样品管垂直放入磁力架卡槽,确保管壁与磁条紧密贴合,保证磁吸力度均匀。
静置时间需足够:普通磁力架静置 1–3 min,待磁珠完全吸附至管壁、溶液澄清后,再进行下一步操作;高黏度样品可延长至 5 min。
严禁未完全磁吸时吸液,否则会导致磁珠流失,降低回收率。
3. 洗涤与洗脱的关键细节
洗涤时,先将样品管从磁力架取下,加入洗涤液后轻柔混匀,再放回磁力架磁吸,待溶液澄清后弃去废液,重复洗涤 2–3 次。
洗脱时,取下样品管,加入洗脱液后充分混匀,可根据需求恒温孵育 5–10 min,再放回磁力架磁吸,吸取上清液即为纯化后的目标样品。
二、 不同场景的专项应用技巧
1. 核酸提取场景
选择适配核酸类型的磁珠(如 DNA 磁珠、RNA 磁珠),磁力架建议选八联管磁力架,适配 96 孔板高通量操作。
磁吸分离时,保持样品管直立,避免磁珠吸附不均;洗脱液建议用预热的 TE 缓冲液或去离子水,提升核酸洗脱效率。
2. 细胞分选场景
选用大孔径磁力架或专用细胞分选磁力架,避免挤压细胞导致破裂。
磁吸过程中保持低温环境(4℃),减少细胞活性损失;分选后用培养基重悬细胞时,需缓慢吹打,避免细胞成团。
3. 蛋白纯化场景
搭配蛋白特异性磁珠使用,磁力架选择微量离心管磁力架,适合小体积样品(0.5–2 mL)。
洗涤液需含适量盐离子,降低非特异性结合;洗脱时可通过调整 pH 值或加入竞争肽,提高蛋白纯度。
三、 提升分离效果的避坑技巧
磁力架选型匹配:小体积样品(<500 μL)用微量磁力架,高通量实验用 96 孔板磁力架,避免 “大材小用” 或 “小架大用” 导致的分离不均。
避免磁珠团聚:磁珠储存时需密封避光,使用前恢复至室温并轻柔混匀;若出现团聚,可低速涡旋后再使用。
防止交叉污染:不同样品需使用独立的磁力架卡槽或一次性套管,实验后及时清洁磁力架表面(用 75% 乙醇擦拭,晾干后使用)。
优化磁吸时间:根据样品体积和磁珠浓度调整,体积越大、磁珠浓度越高,所需磁吸时间越长,以溶液完全澄清为标准。
四、 维护保养辅助技巧
实验后及时清理磁力架表面残留的液体和磁珠,避免磁珠残留影响后续吸附效果。
磁力架应远离强磁场环境和尖锐物品,防止磁条磁力衰减或外壳损坏。