DNA测序建库的核心目标,是在最小化样本损耗的前提下,获得覆盖均匀、无序列偏差、适配不同测序平台的文库分子,而TLX DNA-seq Kit正是围绕这一目标,对建库全链路的每个环节做了针对性设计,其作用覆盖从原始样本到测序-ready文库的全流程,原理则体现在对不同样本类型、不同建库需求的精准适配上。
TLX DNA-seq Kit第一个核心作用是完成原始样本到建库模板的高效转化,对应的原理是适配性的核酸捕获体系。针对不同来源、不同质量的核酸样本,该Kit设计了差异化的纯化方案:针对低丰度的循环肿瘤DNA、宏基因组环境样本等微量核酸,通过优化的磁珠结合体系和低损耗的转移流程,大程度减少样本在纯化环节的损失,避免低丰度靶标被遗漏;针对FFPE病理样本、古DNA等降解类样本,采用了温和的纯化条件,优先保留短片段核酸,避免长片段核酸的非特异性吸附,保证降解样本也能获得足够长度的建库模板,从源头解决了不同样本类型的建库适配难题。
第二个核心作用是将核酸精准转化为带测序接头的文库分子,对应的原理是低偏好的酶促反应体系。建库过程中的末端修复、A尾添加、接头连接三个核心反应环节,传统方法往往容易出现碱基偏好、接头二聚体过多的问题,该Kit采用了高保真的末端修复酶和连接酶,保证核酸末端的精准修饰,避免碱基偏好;同时接头采用了独特的结构设计,大幅降低了同源接头的自连概率,针对微量样本优化了连接反应的缓冲体系,提升了接头连接效率,减少了后续PCR扩增的循环数,从反应源头降低了扩增带来的序列偏差。
第三个核心作用是输出可直接上机的合格文库,对应的原理是多梯度纯化筛选体系。TLX DNA-seq Kit采用了两步梯度纯化的磁珠体系,可以根据目标文库的片段大小精准筛选,有效去除反应残余、未连接的接头、过短的降解片段等杂质,在减少有效文库损失的同时保证文库的纯度,且纯化后的文库无需复杂的质控调整,就能直接适配Illumina、华大智造等主流测序平台的上机要求,大幅简化了建库后的处理流程。整体来看,该Kit的作用是整合了传统建库的多步操作,通过全流程的试剂和条件优化,解决了不同样本建库的痛点,最终实现稳定、高效、低偏差的建库效果。
