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体外蛋白表达有这些特点值得你知道

发布时间:2021-09-09      点击次数:469
  蛋白表达就是重组DNA的一种实现技术,是用人为的方法将某一供体生物的遗传物质-DNA大分子提取出来,之后在离体的条件下用适当的工具酶进行切割,再把它与载体的DNA分子连接起来,然后一起导入受体细胞中,从而使得外源物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达。利用重组蛋白表达技术,对蛋白质功能结构进行研究,给人类生产、生活带来了极大的影响,在各个领域发挥了重要的作用。

  体外蛋白表达在大肠杆菌蛋白表达实验中,经常会遇到蛋白表达不出来、表达出的蛋白没有活性、蛋白表达过程中容易形成包涵体等情况,还要分析出现这些情况的原因:
  1、目的蛋白不适合在大肠杆菌中表达。包括稀有密码子、mRNA结构、跨膜区等;
  2、表达条件需要进一步优化。比如温度、分子伴侣、适合的表达宿主等;
  3、采用哪种温和复性条件可以提高蛋白活性,减少包涵体的形成等等。

  体外蛋白表达系统的特点:
  是一种简单快速的蛋白质体外表达系统。基因的转录和翻译基于大肠杆菌的内源TXTL机制,在体外建立高效的无细胞反应体系。同时,又保证了表达系统的兼容性。
  表达系统操作简单,仅需将线性模板或质粒混匀,目标蛋白在数小时内即可表达出来。不需要转化、克隆筛选和细胞裂解,避免了包涵体的形成。同时,避免了产物纯化过程中目标蛋白的损失。
  蛋白表达系统一次实验可对多个样品进行操作,最小的反应体系是12 μl,表达出来的蛋白浓度能达到1μg/μL,反应体系可等比例扩大。反应系统里添加了多种大肠杆菌稀有密码子,去除了密码子偏好的问题,并且表达的蛋白可正常折叠。

体外蛋白表达

 

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