一、rRNA去除的必要性
在RNA测序(RNA-Seq)中,通常需要先去除rRNA。这是因为总RNA中80%以上都是rRNA,而rRNA提供的转录本信息非常少,且测序时会产生大量无用的rRNA序列数据,浪费宝贵的测序资源。因此去除rRNA可以提高测序效率和数据质量。
二、rRNA去除探针的原理
1、特异性DNA探针杂交与RNase H消化
- 使用特异性的DNA探针与rRNA杂交,形成DNA-RNA杂交链。RNase H能够特异性地消化DNA-RNA杂交链中的RNA单链,而未与探针杂交的mRNA、lncRNA等不受影响,从而富集目标RNA。
2、探针杂交捕获与磁珠吸附
- 通过DNA探针或RNA探针杂交捕获rRNA,然后利用链霉亲和素磁珠吸附去除rRNA。这种方法称为Ribo-Zero-seq。

三、rRNA去除探针的应用
1、物种特异性
- rRNA去除探针需要根据研究物种的rRNA序列设计特异性的杂交探针。
2、不同RNA类型
- 除了去除细胞质中的rRNA,一些试剂盒还可以去除线粒体中的rRNA。
3、样本类型
- rRNA去除探针适用于多种样本类型,包括新鲜样本、降解样本、FFPE(甲醛固定石蜡包埋)样本等。
四、rRNA去除探针的优势
1、高效去除
- rRNA去除探针可以高效去除rRNA,提高目标RNA的富集效率。
2、特异性高
- 探针设计具有高度特异性,能够准确识别并去除rRNA,而不影响其他目标RNA。
3、适用范围广
- 适用于多种物种和样本类型,能够满足不同研究需求。
通过使用rRNA去除探针,可以显著提高RNA测序的效率和数据质量,为转录组研究提供更准确的信息。