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Halo Pull Down(蛋白之间的互作研究)
Halo Pull Down技术是将Halo标签的融合蛋白固相化到磁珠上,与细胞总蛋白进行孵育,鉴定与之相互作用的蛋白。该方法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。
我们的Halo PullDown技术服务利用无细胞蛋白表达系统来表达Halo标签的融合蛋白(诱饵蛋白),节省时间,蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白。 蛋白表达成功后进行纯化,将纯化后的蛋白与细胞裂解液孵育一段时间后,洗去上清蛋白,将与目的蛋白结合的蛋白洗脱,并进行质谱检测。
技术流程
载体构建 | 客户提供目的蛋白对应的CDS的序列或质粒, | 测序结果 | 1-2周 |
克隆至合适的表达载体, | |||
质粒测序, | |||
质粒制备。 | |||
无细胞表达+纯化 | 用小麦芽胚蛋白表达体系进行蛋白表达, | 表达评估报告 | 1周 |
蛋白表达评估 (Western Blot) 。 | |||
Pull Down | 细胞裂解, | 银染结果 | 1周 |
目的蛋白和总蛋白孵育, | |||
洗脱与目的蛋白结合的蛋白。 | |||
质谱检测 | 将洗脱的蛋白进行质谱鉴定。 | 质谱结果 | 2周 |
客户提供材料 | 交付结果 |
新鲜样本(组织或者细胞):细胞数量>2.7ⅹ107; 组织样本>3g | 载体测序结果 实验过程图 质谱结果 |
我们可为您提供Halo Pull Down(蛋白之间的互作研究)技术服务,欢迎咨询!
更多技术服务:
DNA亲和纯化测序(DAP-seq)
在全基因组水平上鉴定转录因子的结合位点,预测转录因子潜在的靶基因。
DAP-seq 技术的出现,使转录因子结合位点的研究不再局限于生物物种,不再受抗体质量的限制,进一步拓展并加深了生命科学领域研究的广度和深度。
DAP-seq与RNA-seq联合分析
分析转录因子的靶基因在RNA-seq数据中的表达变化,深入挖掘DAP-seq和RNA-seq测序数据,增加转录组测序的分析深度。
酵母单杂交技术 (Yeast One-Hybrid)
确定已知 DNA 和蛋白质之间是否存在相互作用。
筛选结合于目标顺式作用元件或其他短 DNA 序列的新蛋白。
鉴定蛋白结合 DNA 的结构域,精准定位与DNA 结合的蛋白序列。
重组蛋白表达
有大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞4种蛋白表达系统可供选择。
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