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浅谈rRNA去除试剂盒使用注意事项

发布时间:2021-08-31      点击次数:162
  rRNA作为总RNA中丰富的成员,提供的转录本信息却少之又少,且检测过多会掩盖其它基因的表达丰度,从而增加低丰度转录本的检测难度。因此,通常在测序之前从总RNA样品中去除rRNA,rRNA去除的效率也被视为z大化读取到转录物的关键因素。
  rRNA去除试剂盒适用于快速提取植物组织RNA,使用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,DNase直接在柱上消化残留DNA,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
  rRNA去除试剂盒使用注意事项:
  1. 所有的离心步骤均可在室温完成,使用可容纳五十ml 离心管的离心机。
  2. 需要自备乙醇,一次性注射器(可选),研钵。
  3. 裂解液RLT 和裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,需要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  4. 植物组织裂解是否充分直接影响到RNA 提取的质量和产量,本试剂盒中提供的裂解液RLT,主要成分为异硫氰酸胍,适用于大多数植物组织的裂解,但有些植物组织(例如玉米的乳白色胚乳)或丝状真菌,由于次级代谢产物较特殊,异硫氰酸胍使样品产生固化,导致RNA 无法提取,此时可以向我们索取另一种裂解液RLC,将解决该问题。

rRNA去除

 

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